2024年4月2日发(作者：出洁玉)
蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册
蛋白免疫印迹杂交
（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂
交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法。WB是进行蛋白质分析最流行和
成熟的技术之一。本指南讨论Western Blot操作方法及常见问题分析，有助于成功完成WB。
A 蛋白样本提取制备
1 细胞或组织裂解
2 蛋白酶和磷酸酶抑制剂
3 蛋白定量
4 电泳上样样品的准备
B 电泳
1 PAGE胶的制备
2 蛋白分子量Marker
3 阳性对照
4 内参对照
5 上样与电泳
C 转膜与显色（Western Blot）
1 胶中蛋白的检测
2 蛋白转膜
3 膜上蛋白的检测：丽春红
4 膜的封闭
5 一抗的孵育
6 二抗的孵育
7 显色
D 常见问题分析与解决方案
附录1 WB实验试剂配制方法
附录2
SDS-
PAGE胶的配制
2024年4月2日发(作者：出洁玉)
蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册
蛋白免疫印迹杂交
（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂
交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法。WB是进行蛋白质分析最流行和
成熟的技术之一。本指南讨论Western Blot操作方法及常见问题分析，有助于成功完成WB。
A 蛋白样本提取制备
1 细胞或组织裂解
2 蛋白酶和磷酸酶抑制剂
3 蛋白定量
4 电泳上样样品的准备
B 电泳
1 PAGE胶的制备
2 蛋白分子量Marker
3 阳性对照
4 内参对照
5 上样与电泳
C 转膜与显色（Western Blot）
1 胶中蛋白的检测
2 蛋白转膜
3 膜上蛋白的检测：丽春红
4 膜的封闭
5 一抗的孵育
6 二抗的孵育
7 显色
D 常见问题分析与解决方案
附录1 WB实验试剂配制方法
附录2
SDS-
PAGE胶的配制