2024年4月10日发(作者：却华灿)

２３２　

ＬＥ　ｒｒｒＥＲＳ　ＩＮ　Ｂ１０ＴＥＣＨＮ０ＬＯＧＹ　Ｖｏ１．２３　Ｎｏ．２　Ｍａｒ．，２０１２　

生　物　技　术　通　讯　

ｄｏｉ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１００９—０００２．２０１２．０２．０２０　

研究报告　

芜菁ＵＦ３ＧＴ基因的克隆及表达特性　

许志茹，佟玲，侯杰，崔国新　

东北林业大学生命科学学院，林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室，黑龙江哈尔滨１５００４０　

［摘要］　目的：克隆‘津田’芜菁和‘赤丸’芜菁的ＵＤＰ一葡萄糖：类黄酮３—０一葡萄糖基转移酶（ＵＦ３ＧＴ）基因并研究其　

表达特性。方法：利用ＲＴ—ＰＣＲ方法克隆‘津田’芜菁ＢｒＵＦ３ＧＴ１基因和‘赤丸’芜菁ＢｒＵＦ３ＧＴ２基因，并进行生物信息　

学分析；通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测ＢｒＵＦ３ＧＴ１和ＢｒＵＦ３ＧＴ２基因的ＵＶ—Ａ诱导表达特性；对ＢｒＵＦ３ＧＴ１和ＢｒＵＦ３ＧＴ２基因　

进行原核诱导表达。结果：ＢｒＵＦ３ＧＴ１和ＢｒＵＦ３ＧＴ２的开放读框为１４０７　ｂｐ，编码４６８个氨基酸残基；氨基酸序列分析　

显示，ＢｒＵＦ３ＧＴ１和ＢｒＵＦ３ＧＴ２与拟南芥ＵＦ３ＧＴ的同源性为８７％，从第１６～４５３位氨基酸残基的肽段具有糖基转移酶　

家族成员的结构域；ＢｒＵＦ３ＧＴ１和ＢｒＵＦ３ＧＴ２基因具有高度同源性，核苷酸序列在７个位点存在差异，推导的氨基酸序　

列在１个位点存在差异；Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果显示，ＵＶ—Ａ可以诱导ＢｒＵＦ３ＧＴ１和ＢｒＵＦ３ＧＴ２基因表达，基因的表达量与　

处理时间相关；原核诱导表达及纯化后可以获得相对分子质量分别约为５１．８８×１０　和５１．８９ｘ１０。的ＢｒＵＦ３ＧＴ１和　

ＢｒＵＦ３ＧＴ２蛋白。结论：克隆了‘津田’芜菁和‘赤丸’芜菁的ＵＦ３ＧＴ基因，为初步阐明２种芜菁的花青素生物合成机理　

奠定了实验基础。　

［关键词］　芜菁；ＵＤＰ一葡萄糖：类黄酮３一Ｄ一葡萄糖基转移酶；基因克隆；序列分析；基因表达　

［中图分类号］Ｑ９４３．２　［文献标识码］Ａ　［文章编号］　１００９—０００２（２０１２）０２—０２３２—０６　

Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＵＤＰ－Ｇｌｕｅｏｓｅ：Ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　３一Ｏ—Ｇｌｕｃｏｓｙｌ－　

ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ　Ｇｅｎｅ（ＵＦ３ＧＴ）ｉｎ　Ｔｕｒｎｉｐ　

ｘｕ　Ｚｈｉ—Ｒｕ　，ＴＯＮＧ　Ｌｉｎｇ，ＨＯＵ　ｆｉｅ，ＣＵＩ　Ｇｕｏ－Ｘｉｎ　

Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔ　Ｔｒｅｅ　Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ　

ａｎｄ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｍｉｎｉｓｔｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｒｏｎ，Ｈａｒｂｉｎ　１５００４０，Ｃｈｉｎａ　

Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ．Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｕｚｈｉｒｕ２００３＠１２６．ｃｏｍ　

［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｃｌｏｎｅ　ｔｈｅ　ＵＤＰ—ｇｌｕｃｏｓｅ：ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　３－Ｏ—ｇｌｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＵＦ３ＧＴ）ｇｅｎｅｓ　ｏｆ‘Ｔｓｕｄａ’　

ｔｕｒｎｉｐ　ａｎｄ‘Ｙｕｒｕｇｉ　Ａｋａｍａｒｕ’ｔｕｒｎｉｐ，ａｎｄ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｔｒａｉｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＢｒＵＦ３ＧＴ１　ｇｅｎｅ　ｏｆ　

‘Ｔｓｕｄａ’ｔｕｒｎｉｐ　ａｎｄ　ＢｒＵＦ３ＧＴ２　ｇｅｎｅ　ｏｆ‘Ｙｕｒｎｇｉ　Ａｋａｍａｒｎ’ｔｕｒｎｉｐ　ｗｅｒｅ　ｃｌｏｎｅｄ　ｂｙ　ＲＴ－ＰＣＲ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｚｅｄ　

ｂｙ　ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ＵＶ－Ａ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　

ｂｌｏｔ．Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＢｒＵＦ３ＧＴ１　ａｎｄ　ＢｒＵＦ３ＧＴ２　ｇｅｎｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｏｐｅｎ　ｒｅａｄ—　

ｉｎｇ　ｆｒａｍｅ　ｏｆ　ＢｒＵＦ３ＧＴ１　ａｎｄ　ＢｒＵＦ３ＧＴ２　ｇｅｎｅｓ　ｃｏｎｔａｉｎｅｄ　１４０７　ｂｐ　ｅｎｃｏｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　４６８　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ．Ａｍｉｎｏ　ａｃ—　

ｉｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ＢｒＵＦ３ＧＴ１　ａｎｄ　ＢｒＵＦ３ＧＴ２　ｗｅｒｅ　８７％ｉｄｅｎｔｉｔｉｅｄ　ｔｏ　ＵＦ３ＧＴ　ｏｆ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｔｈａｌｉ—　

ａｎａ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｇｌｙｃｏｓｙｈｒａｎｓｆｅｒａｓｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｆａｍｉｌｙ　ｄｏｍａｉｎ　ｗａｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｆｒｏｍ　１６　ｔｏ　４５３．ＢｒＵＦ３ＧＴ１　ａｎｄ　

ＢｒＵＦ３ＧＴ２　ｇｅｎｅｓ　ｈａｄ　ｈｉｇｈ　ｉｄｅｎｔｉｔｙ．Ｔｈｅ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ＢｒＵＦ３ＧＴ１　ａｎｄ　ＢｒＵＦ３ＧＴ２　ｇｅｎｅｓ　ｈａｄ　７　ｄｉｆｆｅｒｅｎｅ—　

ｅｓ，ａｓ　ｗｅｌｌ　ａｓ　１　ｉｎ　ｄｅｄｕｃｅｄ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ．Ｔｈｅ　Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ　ｒｅｓｕｈｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　

ＢｒＵＦ３ＧＴ１　ａｎｄ　ＢｒＵＦ３ＧＴ２　ｇｅｎｅｓ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＵＶ—Ａ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｓ　ｗａｓ　

ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｌｉｇｈｔ－ｅｘｐｏｓｕｒｅ　ｔｉｍｅ．Ｔｈｅ　５１．８８　ｋＤ　ａｎｄ　５１．８９　ｋＤ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　ＢｒＵＦ３ＧＴ１　ａｎｄ　ＢｒＵＦ３ＧＴ２　ｗｅｒｅ　ｓｕｅ—　

ｃｅｓｓｆｕｌｌｙ　ｐｕｒｉｉｅｄ　ａｆｔｆｅｒ　ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ＵＦ３ＧＴ　ｇｅｎｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｌｏｎｅｄ　ｆｒｏｍ‘Ｔｓｕｄａ’　

ｔｕｒｎｉｐ　ａｎｄ‘Ｙｕｒｕｇｉ　Ａｋａｍａｒｎ’ｔｕｒｎｉｐ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ，ｗｈｉｃｈ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙ　ｃｌａｒ—　

ｉｆｙｉｎｇ　ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅｓｅ　ｔｗｏ　ｔｕｒｎｉｐｓ．　

［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］ｔｕｒｎｉｐ；ＵＤＰ—ｇｌｕｃｏｓｅ：ｌｆａｖｏｎｏｉｄ　３－Ｏ－ｇｌｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ；ｇｅｎｅ　ｃｌｏｎｅ；ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ；ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　

植物花青素是重要的类黄酮类物质，积累在维　

收稿日期：２０１１－０６—１０　

基金项Ｅ１：黑龙江省博士后科研启动金（ＬＢＨ—Ｑ０８１４６）；中央高校基　

本科研业务费专项资金（ＤＬ１０ＣＡ０３）　

作者简介：许志茹（１９７２一），女，副教授　

管植物液泡中，决定花卉、果实和种子的颜色　。花　

青素的生物合成由一系列酶催化，ＵＤＰ一葡萄糖：类　

黄酮３－０一葡萄糖基转移酶（ＵＤＰ—ｇｌｕｃｏｓｅ：ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　

３－０一ｇｌｕｃ０ｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＵＦ３ＧＴ）是花青素合成晚期　

途径的重要催化酶，负责将糖基连接到不稳定的花　

通信作者：许志茹，（Ｅ—ｍａｉｌ）ｘｕｚｈｉｒｕ２００３＠１２６．ｃｏｎ　

许志茹等：芜菁ＵＦ３ＧＴ基因的克隆及表达特性　２３３　

青素上使之变成花青素糖苷，由此，糖基化的花青素　

才能稳定存在并运输到液泡中贮存　。目前，一些植　

ＡＣＣＡＡＴＧＣＣＣＴＣ一３　）。原核表达载体构建引物为　

Ｆ　１（５　一ＴＧＣＡＡＡＴＧＧＧＴＧＴＴＴＴＴＧＧＡＴＣＣ－３　）、Ｒ　１　

（５　一ＧＣＡＴＧＡＡＣＴＣＡＴＧＡＣＴＴＣＡＣＡＡＧＴＴＣ一３　）、Ｆ２　

物的ＵＦ３ＧＴ基因已经被克隆　。植物中，花青素的　

生物合成还与转录因子密切相关　。　

（５　一ＧＧＡＡＴＴＣＣＡＴＡＴＧＣＡＡＡＴＧＧＧＴＧ一３　）　和　Ｒ２　

光不仅提供植物光合作用所需的能量，同时也　

提供植物适应周围环境正常生长所需的信息。花和　

果实中的花青素生物合成与光受体和光信号传导因　

子密切相关　。紫外线可以调节植物中花青素的生　

物合成［１０］ｏ　ＵＶ—Ｂ照射可以诱导大豆（Ｇｌｙｃｉｎｅ　ｍａｘ　

（５　一ＴＡＡＡＡＧＴＴＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＧＡＡＣＴＣ一３　）（由于　

原核诱导表达引物引入酶切位点和保护碱基后序列　

过长，所以分２次ＰＣＲ反应将引物序列加全）。　

１．３　ＵＦ３ＧＴ全长ｃＤＮＡ的克隆及序列分析　

按许志茹等的方法克隆‘津田’和‘赤丸’芜菁的　

ｅｕｌｔｉｖａｒ　Ｓｉｎｐａｌｄａ１）花青素合成相关催化酶基因的上　

调表达　“。另外，‘津田’芜菁　Ｊ和ＢｒＦ３＂１４　基　

因的表达量随着ＵＶ—Ａ处理时间的延长而增加　，　

这种现象与花青素含量的增加是协同的。目前依光　

型和非依光型花青素的生物合成机理还不清楚。　

芜菁别名小蔓菁，十字花科芸苔属芜菁亚种。　

‘津田’芜菁（‘Ｔｓｕｄａ’ｔｕｒｎｉｐ）块根着色时需要光，受　

光照部分呈紫红色，背光部分呈白色。‘赤丸’芜菁　

（‘Ｙｕｒｕｇｉ　Ａｋａｍａｒｕ’ｔｕｒｎｉｐ）块根无论受光与否都呈　

红色，块根在黑暗条件下即可着色。我们以‘津田’　

芜菁和‘赤丸’芜菁为试材，通过ＲＴ—ＰＣＲ方法克隆　

了２种芜菁的　乃Ｇ　基因，利用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测　

了ＵＶ—Ａ处理条件下ＵＦ３ＧＴ基因的表达变化，同时　

通过原核诱导表达纯化了２种芜菁的ＵＦ３ＧＴ蛋白。　

这些工作将为分离依光型和非依光型花青素合成关　

键催化酶基因，研究依光型和非依光型花青素生物　

合成机理奠定基础。　

１材料与方法　

１．１　材料　

温室种植芜菁（Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ　Ｌ．ｓｓｐ．ｒａ．　

ｐｎ）‘津田’和‘赤丸’２个品种纯系，块根始终在土中　

避光生长。块根膨大２个月后，用３５２　ｎｍ的ＵＶ—Ａ　

［光照强度１３．５￣ｘｍｏｌ／（ｍ　・ｓ）］分别处理块根０、６、　

１２、１８、２４和４８　ｈ。　

ＬＡ—Ｔａｑ　ＤＮＡ聚合酶及ＤＮＡ　Ｍａｒｋｅｒ等购自宝　

生物工程有限公司（大连）；ｐＢＳ—Ｔ载体购自北京　

ＴＩＡＮＧＥＮ生化科技有限公司；ＰｏｗｅｒＳｃｒｉｐｔ反转录酶　

购自Ｃｌｏｎｔｅｃｈ公司；Ｎｏｒｔｈｒｅｎ杂交部分试剂购自　

Ｒｏｃｈｅ公司；原核表达蛋白纯化柱ＨｉｓＴｒａｐ　ＨＰ购自　

ＧＥ公司。　

１．２　引物序列　

在Ｄａｔａｂａｓｅ数据库中选取拟南芥的　乃Ｇ　基因　

序歹０设计ＲＴ—ＰＣＲ弓ｌ物Ｆ（５　一ＡＡＡＴＧＧＧＴＧＴＴＴＴＴＧ　

ＧＡＴＣＧ一３　）和Ｒ（５　一ＡＴＧＡＡＣＴＣＡＴＧＡＣＴＴＣＡＣＡＡ　

ＧＴＴＣ一３　）。探针合成的引物序列为Ｆ（５＂－ＴＧＴＴＴＧ　

ＣＴＡＣＡＡＴＡＣＣＧＴＣＡＧＣ一３　）和Ｒ（５　一ＧＡＡＧＡＡＡＧＡ　

ＵＦ３Ｇ　基因，测序后的核苷酸序列进行ＢＬＡＳＴ比　

对、开放读框（ＯＲＦ）寻找、分子进化树绘制及蛋白性　

质预测等生物信息学分析　。　

１．４　Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交　

利用地高辛标记探针，通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测２　

种芜菁中　３Ｇ　基因的表达变化情况　，重复３次。　

１．５　‘津田’芜菁ＵＦ３Ｇ　基因　，　Ｇ　和‘赤丸’芜　

菁ＵＦ３ＧＴ基因ＢｒＵＦ３ＧＴ２的原核诱导表达　

通过２次ＰＣＲ反应将含有Ｎｄｅ　Ｉ和ＮｏｔＩＩ酶切位　

点及保护碱基的核苷酸序列加到目的基因的两侧。　

回收纯化ＰＣＲ产物后，利用Ｎｄｅ　Ｉ和ＮｏｔＵ酶切ＰＣＲ　

纯化产物和载体ｐＥＴ一１４ｂ，回收酶切后的目的片段，　

在Ｔ　ＤＮＡ连接酶的作用下连接ＰＣＲ产物和载体酶　

切后的目的片段。连接产物热激转化大肠杆菌　

ＤＨ５　感受态细胞，提取质粒后通过ＰＣＲ和酶切验证　

筛选阳性克隆，测序验证阳性克隆。将测序正确的　

质粒转化到大肠杆菌ＢＬ２１中，ＰＣＲ验证。在ＬＢ液　

体培养基（含５０　ｍｇ／Ｌ氨苄西林）中接种含重组质粒　

ｐＥＴ一１４ｂ—ＢｒＵＦ３ＧＴ１和ｐＥＴ一１４ｂ—ＢｒＵＦ３ＧＴ２的大肠　

杆菌ＢＬ２１，３７ｏＣ培养至Ｄ　为０．５　０．６，留取０．５　ｍＬ　

菌液作为诱导前样品，剩余菌液加ＩＰＴＧ至终浓度为　

１　ｍｍｏｌ／Ｌ，继续培养诱导目的蛋白表达。３　ｈ后取　

５００　Ｌ诱导后样品，与诱导前样品一起经１２　０００　ｒ／　

ｍｉｎ离心１　ｍｉｎ收集菌体。弃上清，用６０　Ｌ　ｌｘＳＤＳ　

上样缓冲液吸打悬浮沉淀。１００ｏＣ加热５　ｍｉｎ，室温　

离心１　ｍｉｎ，取上清进行ＳＤＳ—ＰＡＧＥ，分析诱导结果，　

利用ＨｉｓＴｒａｐ　ＨＰ（ＧＥ　Ｈｅａｈｈｃａｒｅ）Ｈｉｓ标签亲和层析　

柱纯化融合蛋白ＢｒＵＦ３ＧＴ１和ＢｒＵＦ３ＧＴ２ｔ　】，　

ＳＤＳ—ＰＡＧＥ检测纯化结果。　

２　结果　

２．１　‘津田’芜菁和‘赤丸’芜菁　ＧＴ基因全长　

ｃＤＮＡ的克隆　

提取２种芜菁总ＲＮＡ后利用基因特异性引物进　

行ＲＴ—ＰＣＲ反应，结果（图１）显示，扩增的ｃＤＮＡ产　

物约为１４００　ｂｐ，大小与预期吻合。ＲＴ—ＰＣＲ产物经　

纯化、连接、转化和扩大培养后提取重组质粒。以质　

２６６　

ＬＥ　ｒＴＥＲ　

ＴＴ　Ｓ　ＩＮ技

ｖｏ１．・　２３　Ｎｔ…ｏ．２・　一Ｍａｒ．一一・，２，　…０１２一　

ＢＩＯＴＥＣＨＮ

０ＬＯＧ

Ｙ…

术

通

讯

［１０】Ｗａｃｋｅｒ　Ｍ，Ｌｉｎｔｏｎ　Ｄ，Ｈｉｔｃｈｅｎ　Ｐ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．Ｎ—ｌｉｎｋｅｄ　ｇｌｙｃｏｓｙｌ－　

３Ｉ５５—３１５６．　

ａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ　ｊｅｊｕｎｉ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｉｎｔｏ　

Ｅ，ｃｏｌｉ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００２，２９８（５５９９）：１７９０—１７９３．　

［１　１］Ｗａｅｋｅｒ　Ｍ，Ｆｅｌｄｍａｎ　Ｍ　Ｆ，Ｃａｌｌｅｗａｅｒｔ　Ｎ，ｅｔ　ａ１．Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ　ｓｐｅｃｉ—　

ｆｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　０ｌ　０ｓａｃｃｈａｒｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ　ｓｕｇｇｅｓｔｓ　ａ　ｃｏｍｍｏｎ　

ｔｒａｎｓｆｏｒ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｎｄ　ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ　ｓｙｓｔｅｍｓ　

［１８】Ｃａｓｔｒｉｃ　Ｐ．ｐｉｌｏ，ａ　ｇｅｎｅ　ｒｅｑｕｉｒｅｄ　ｆｏｒ　ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｓｅｕｄｏｍｏ．　

Ｉｌａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　１２４４　ｐｉｌｉｎ［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９９５，１４１（Ｐｔ５）：　

１２４７－１２５４．　

［１９］Ｄｉｇｉａｎｄｏｍｅｎｉｃｏ　Ａ，Ｍａｔｅｗｉｓｈ　Ｍ　Ｊ，Ｂｉｓａｉｌｌｏｎ　Ａ．ｅｔ　ａ１．Ｇｌｙｃｏｓｙｌ—　

ａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　１２４４　ｐｉｌｉｎ：ｇｌｙｃａｎ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅ　

［Ｊ】．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｅａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ，２００６，１０３（１８）：７０８８—７０９３．　

［１２］Ｆｅｌｄｍａｎ　Ｍ　Ｆ，Ｗａｃｋｅｒ　Ｍ，Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　

Ｎ—＿ｌｉｎｋｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｄｉｖｅｒｓｅ　Ｏ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｌｉｐｏｐｏｌｙ・　

ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００２，４６（２）：５１９—５３０．　

［２０］Ｓｍｅｄｌｅｙ　Ｊ　Ｒ，Ｊｅｗｅｌｌ　Ｅ，Ｒｏｇｕｓｋｉｅ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｐｉｌｉｎ　

ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ　ｏｎ　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　１２４４　ｐｉｌｕｓ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　

ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　ｉｎ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　

Ｓｃｉ　ＵＳＡ，２００５，ｌＯ２（８）：３Ｏ１６—３Ｏ２１．　

［１３】Ｃｈｅｎ　Ｍ　Ｍ，Ｇｌｏｖｅｒ　Ｋ　Ｊ，Ｉｍｐｅｒｉａｌｉ　Ｂ．Ｆｒｏｍ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｔｏ　ｐｒｏ－　

ｔｅｉｎ：ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅ　ｓｐｅｃｉｉｆｃｉｔｙ　ｏｆ　

［Ｊ］．Ｉｎｆｅｃｔ　Ｉｍｍｕｎ，２００５，７３（１２）：７９２２—７９３１．　

［２ｌ】Ｃｏｍｅｒ　Ｊ　Ｅ，Ｍａｒｓｈａｌｌ　Ｍ　Ａ，Ｂｌａｎｃｈ　Ｖ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　

ｏｆ　ｔｈｅ　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　１２４４　ｐｉｌｉｎ　ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ　ｓｉｔｅ　

『Ｊ１．Ｉｎｆｅｃｔ　Ｉｍｍｕｎ，２００２，７０（６）：２８３７—２８４５．　

［２２】Ｈｏｒｚｅｍｐａ　Ｊ，Ｄｅａｎ　Ｃ　Ｒ，Ｇｏｌｄｂｅｒｇ　Ｊ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅ．　

ｒｕｇｉｎｏｓａ　１２４４　ｐｉｌｉｎ　ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ：ｇｌｙｃａｎ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅ　ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ　

Ｎ—ｌｉｎｋｅｄ　ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２００７，４６　

（１８）：５５７９－５５８５．　

［１４】Ｋｏｗａｒｉｋ　Ｍ，Ｎｕｍａｏ　Ｓ，Ｆｅｌｄｍａｎ　Ｍ　Ｆ，ｅｔ　ａ１．Ｎ—ｌｉｎｋｅｄ　ｇｌｙｃｏｓｙｌ　

ａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｏｌｄｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｏｌｉｇｏｓａｅｃｈａｒｙｌｔｒａｎｓｆｅｒ－　

Ｕ】．Ｊ　Ｂａｅｔｅｒｉｏｌ，２００６，１８８（１２）：４２４４—４２５２．　

［２３】Ｈｏｒｚｅｍｐａ　Ｊ，Ｃｏｍｅｒ　Ｊ　Ｅ，Ｄａｖｉｓ　Ｓ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ　ｓｕｂ—　

ｓｔｒａｔｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ　ｏｆ　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　１２４４　ｐｉｌｉｎ［Ｊ］．Ｊ　

ａｓｅ［Ｊ１．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００６，３１４（５８０２）：１１４８—１１５０．　

［１５】Ｆａｒｉｄｍｏａｙｅｒ　Ａ，Ｆｅｎｔａｂｉｌ　Ｍ　Ａ，Ｍｉｌｌｓ　Ｄ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　

ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｏｌｉｇｏｓａｃｅｈａｒｙｈｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　

Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ，２００６，２８１（２）：１　１２８—１　１３６．　

［２４］Ｌｉｚａｋ　Ｃ，Ｆａｎ　Ｙ　Ｙ，Ｗｅｂｅｒ　Ｔ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｎ—Ｌｉｎｋｅｄ　Ｇｌｙｃｏｓｙｌ—　

ｉｎ　Ｏ－ｌｉｎｋｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ，２００７，１８９（２２）：　

８０８８—８０９８．　

ａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｎｔｉｂｏｄｙ　Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ｉｎ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ［Ｊ］．Ｂｉｏｅｏｎｊｕｇ　

Ｃｈｅｍ，２０１　１，２２（３）：４８８－４９６．　

【２５】Ａｄｄｅ￣ｏｎ　Ｅ　Ｅ．Ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅｓ　ｉｎ　ｉｎｆａｎｔｓ　ａｎｄ　ａｄｕｌｔｓ：ｅｆ－　

ｆｅｅｔｓ　ｏｆ　Ｔ—ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ａｎｄ　Ｔ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉ０ｎｓ［ＪＪ．　

Ｓｐｒｉｎｇｅｒ　Ｓｅｍｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ，２００１，２３（４）：３８７—４０３．　

［２６］Ｋｏｗａｒｉｋ　Ｍ，Ｙｏｕｎｇ　Ｎ　Ｍ，Ｎｕｍａｏ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　

ｂａｃｔｅｒｉａｌ　Ｎ—ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ　ｓｉｔｅ　ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ［Ｊ］．ＥＭＢＯ　

Ｊ，２００６，２５（９）：１９５７—１９６６．　

【１６］Ｆａｒｉｄｍｏａｙｅｒ　Ａ，Ｆｅｎｔａｂｉｌ　Ｍ　Ａ，Ｈａｕｒａｔ　Ｍ　Ｆ，ｅｔ　ａ１．Ｅｘｔｒｅｍｅ　

ｓｕｂｓｔｒａｔｅ　ｐｒｏｍｉｓｃｕｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ　ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｙｌ　ｔｒａｎｓｆｅｒ—　

ａｓｅ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　０一ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ，２００８，　

２８３（５０）：３４５９６—３４６０４．　

［１７］Ｙｅ　Ｘ　Ｙ，Ｌｏ　Ｍ　Ｃ，Ｂｒｕｎｎｅｒ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｂｅｔｔｅｒ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ　ｆｏｒ　ｂａｃ—　

ｔｅｒｉａｌ　ｔｒａｎｓｇｌｙｃｏｓｙｌａｓｅｓ［Ｊ］．Ｊ　Ａｍ　Ｃｈｅｍ　Ｓｏｃ，２００１，１２３（１３）：　

（上接第２３７页）　

Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｔｈａｌｉａｎａ　ｒｏｏｔ　ｇａｌｌｓ　ｃａｕｓｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｏｂｌｉｇａｔｅ　ｂｉｏｔｒｏ－　

ｐｈｉｃ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ　ｂｒａｓｓｉｃａｅ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｐｌａｎｔ　Ｐａｔｈｏｌ，　

［１　１】Ｋｉｍ　Ｂ　Ｇ，Ｋｉｍ　Ｊ　Ｈ，Ｋｉｍ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｌｓ　

ｉｎ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｏ　ｕｈｒａｖｉｏｌｅｔ－Ｂ　ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｓｏｙｂｅａｎ　ｉｓ　ｒｅｌａｔｅｄ　

２０１０，１１（４）：５４５—５６２．　

［１７］许志茹，崔国新，李春雷，等．芜菁黄烷酮３一羟化酶基因的克　

隆、序列分析及表达ＩＪ】．分子植物育种，２００８，６（４）：７８７—７９２．　

［１８】Ｚｈｏｕ　Ｂ，Ｌｉ　Ｙ　Ｈ，Ｘｕ　Ｚ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ－Ａ　ｓｐｅｃｉｉｆｃ　ｉｎｄｕｃ—　

ｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｗｏｌｌｅｎ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌｓ　ｏｆ　

ｔｏ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌａｖａｎｏｎｅ　３一Ｂ—ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ　ａｎｄ　ｆｌａｖｏｎｏｌ　ｓｙｎ—　

ｔｈａｓｅ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｃｅｌｌｓ，２００８，２５（２）：２４７—２５２．　

【１２】许志茹，崔国新，李春雷，等．芜菁的类黄酮３’羟化酶基因克　

隆和ｕＶ—Ａ诱导表达特性［Ｊ】．植物生理学通讯，２００８，４４（５）：　

９３１－９３５．　

ｔｕｒｎｉｐ（Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｒａｐａ）［Ｊ］．Ｊ　Ｅｘｐ　Ｂｏｔ，２００７，５８（７）：１７７１—１７８１．　

［１９］Ｌｅｅ　Ｙ，Ｙｏｏｎ　Ｈ　Ｒ，Ｐａｉｋ　Ｙ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｃｉｐｒｏｃａｌ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　

Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ＵＧＴ７８Ｄ２　ａｎｄ　ＢＡＮＹＵＬＳ　ｉｓ　ｃｒｉｔｉｃａｌ　ｆｏｒ　ｒｅｇｕｌａ—　

ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ｆｌｕｘ　ｏｆ　ａｎｔｈ０ｃｙａｎｉｄｉｎｓ　ｔｏ　ｃｏｎｄｅｎｓｅｄ　ｔａｎ—　

【１３］许志茹，崔国新，李春雷，等．津田芜菁和赤丸芜菁苯丙氨酸　

解氨酶基因（ＰＡＬ）的克隆和表达［Ｊ】．植物生理学通讯，２００８，４４　

（３）：４８５－４９０．　

【１４］许志茹，李玉花．利用ｃＤＮＡ微阵列分离津田芜菁花青素生物　

合成相关基因［Ｊ］．遗传，２００６，２８（９）：１１０１－１１０６．　

［１５】李波，倪志勇，石庆华，等．棉花咖啡酸一０一甲基转移酶基因原　

核表达及蛋白纯化鉴定［Ｊ］．西北植物学报，２０１０，３Ｏ（９）：　

１７３８—１７４３．　

ｎｉｎｓ　ｉｎ　ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ　ｓｅｅｄ　ｃｏａｔｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｐｌａｎｔ　Ｂｉｏｌ，２００５，４８（４）：　

３５６—３７０．　

［２０］Ｌａｌｕｓｉｎ　Ａ　Ｇ，Ｏｈｔａ　Ｍ，Ｆｕｊｉｍｕｒａ　Ｔ．Ｔｅｍｐｏｒａｌ　ａｎｄ　ｓｐａｔｉａｌ　ｅｘ—　

ｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｄｕｒｉｎｇ　

ｓｗｅｅｔ　ｐｏｔａｔｏ（１ｐｏｍｏｅａ　ｂａｔａｔａｓ［Ｌ．】Ｌａｍ．）ｒｏｏｔ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［Ｊ］．　

Ｉｎｔ　Ｊ　Ｐｌａｎｔ　Ｓｃｉ，２００６，１６７（２）：２４９—２５６．　

【１６］Ｐａｓｏｌｄ　Ｓ，Ｓｉｅｇｅｌ　Ｉ，Ｓｅｉｄｅｌ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｉｎ　

2024年4月10日发(作者：却华灿)

２３２　

ＬＥ　ｒｒｒＥＲＳ　ＩＮ　Ｂ１０ＴＥＣＨＮ０ＬＯＧＹ　Ｖｏ１．２３　Ｎｏ．２　Ｍａｒ．，２０１２　

生　物　技　术　通　讯　

ｄｏｉ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１００９—０００２．２０１２．０２．０２０　

研究报告　

芜菁ＵＦ３ＧＴ基因的克隆及表达特性　

许志茹，佟玲，侯杰，崔国新　

东北林业大学生命科学学院，林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室，黑龙江哈尔滨１５００４０　

［摘要］　目的：克隆‘津田’芜菁和‘赤丸’芜菁的ＵＤＰ一葡萄糖：类黄酮３—０一葡萄糖基转移酶（ＵＦ３ＧＴ）基因并研究其　

表达特性。方法：利用ＲＴ—ＰＣＲ方法克隆‘津田’芜菁ＢｒＵＦ３ＧＴ１基因和‘赤丸’芜菁ＢｒＵＦ３ＧＴ２基因，并进行生物信息　

学分析；通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测ＢｒＵＦ３ＧＴ１和ＢｒＵＦ３ＧＴ２基因的ＵＶ—Ａ诱导表达特性；对ＢｒＵＦ３ＧＴ１和ＢｒＵＦ３ＧＴ２基因　

进行原核诱导表达。结果：ＢｒＵＦ３ＧＴ１和ＢｒＵＦ３ＧＴ２的开放读框为１４０７　ｂｐ，编码４６８个氨基酸残基；氨基酸序列分析　

显示，ＢｒＵＦ３ＧＴ１和ＢｒＵＦ３ＧＴ２与拟南芥ＵＦ３ＧＴ的同源性为８７％，从第１６～４５３位氨基酸残基的肽段具有糖基转移酶　

家族成员的结构域；ＢｒＵＦ３ＧＴ１和ＢｒＵＦ３ＧＴ２基因具有高度同源性，核苷酸序列在７个位点存在差异，推导的氨基酸序　

列在１个位点存在差异；Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果显示，ＵＶ—Ａ可以诱导ＢｒＵＦ３ＧＴ１和ＢｒＵＦ３ＧＴ２基因表达，基因的表达量与　

处理时间相关；原核诱导表达及纯化后可以获得相对分子质量分别约为５１．８８×１０　和５１．８９ｘ１０。的ＢｒＵＦ３ＧＴ１和　

ＢｒＵＦ３ＧＴ２蛋白。结论：克隆了‘津田’芜菁和‘赤丸’芜菁的ＵＦ３ＧＴ基因，为初步阐明２种芜菁的花青素生物合成机理　

奠定了实验基础。　

［关键词］　芜菁；ＵＤＰ一葡萄糖：类黄酮３一Ｄ一葡萄糖基转移酶；基因克隆；序列分析；基因表达　

［中图分类号］Ｑ９４３．２　［文献标识码］Ａ　［文章编号］　１００９—０００２（２０１２）０２—０２３２—０６　

Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＵＤＰ－Ｇｌｕｅｏｓｅ：Ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　３一Ｏ—Ｇｌｕｃｏｓｙｌ－　

ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ　Ｇｅｎｅ（ＵＦ３ＧＴ）ｉｎ　Ｔｕｒｎｉｐ　

ｘｕ　Ｚｈｉ—Ｒｕ　，ＴＯＮＧ　Ｌｉｎｇ，ＨＯＵ　ｆｉｅ，ＣＵＩ　Ｇｕｏ－Ｘｉｎ　

Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔ　Ｔｒｅｅ　Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ　

ａｎｄ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｍｉｎｉｓｔｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｒｏｎ，Ｈａｒｂｉｎ　１５００４０，Ｃｈｉｎａ　

Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ．Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｕｚｈｉｒｕ２００３＠１２６．ｃｏｍ　

［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｃｌｏｎｅ　ｔｈｅ　ＵＤＰ—ｇｌｕｃｏｓｅ：ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　３－Ｏ—ｇｌｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＵＦ３ＧＴ）ｇｅｎｅｓ　ｏｆ‘Ｔｓｕｄａ’　

ｔｕｒｎｉｐ　ａｎｄ‘Ｙｕｒｕｇｉ　Ａｋａｍａｒｕ’ｔｕｒｎｉｐ，ａｎｄ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｔｒａｉｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＢｒＵＦ３ＧＴ１　ｇｅｎｅ　ｏｆ　

‘Ｔｓｕｄａ’ｔｕｒｎｉｐ　ａｎｄ　ＢｒＵＦ３ＧＴ２　ｇｅｎｅ　ｏｆ‘Ｙｕｒｎｇｉ　Ａｋａｍａｒｎ’ｔｕｒｎｉｐ　ｗｅｒｅ　ｃｌｏｎｅｄ　ｂｙ　ＲＴ－ＰＣＲ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｚｅｄ　

ｂｙ　ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ＵＶ－Ａ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　

ｂｌｏｔ．Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＢｒＵＦ３ＧＴ１　ａｎｄ　ＢｒＵＦ３ＧＴ２　ｇｅｎｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｏｐｅｎ　ｒｅａｄ—　

ｉｎｇ　ｆｒａｍｅ　ｏｆ　ＢｒＵＦ３ＧＴ１　ａｎｄ　ＢｒＵＦ３ＧＴ２　ｇｅｎｅｓ　ｃｏｎｔａｉｎｅｄ　１４０７　ｂｐ　ｅｎｃｏｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　４６８　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ．Ａｍｉｎｏ　ａｃ—　

ｉｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ＢｒＵＦ３ＧＴ１　ａｎｄ　ＢｒＵＦ３ＧＴ２　ｗｅｒｅ　８７％ｉｄｅｎｔｉｔｉｅｄ　ｔｏ　ＵＦ３ＧＴ　ｏｆ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｔｈａｌｉ—　

ａｎａ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｇｌｙｃｏｓｙｈｒａｎｓｆｅｒａｓｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｆａｍｉｌｙ　ｄｏｍａｉｎ　ｗａｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｆｒｏｍ　１６　ｔｏ　４５３．ＢｒＵＦ３ＧＴ１　ａｎｄ　

ＢｒＵＦ３ＧＴ２　ｇｅｎｅｓ　ｈａｄ　ｈｉｇｈ　ｉｄｅｎｔｉｔｙ．Ｔｈｅ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ＢｒＵＦ３ＧＴ１　ａｎｄ　ＢｒＵＦ３ＧＴ２　ｇｅｎｅｓ　ｈａｄ　７　ｄｉｆｆｅｒｅｎｅ—　

ｅｓ，ａｓ　ｗｅｌｌ　ａｓ　１　ｉｎ　ｄｅｄｕｃｅｄ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ．Ｔｈｅ　Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ　ｒｅｓｕｈｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　

ＢｒＵＦ３ＧＴ１　ａｎｄ　ＢｒＵＦ３ＧＴ２　ｇｅｎｅｓ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＵＶ—Ａ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｓ　ｗａｓ　

ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｌｉｇｈｔ－ｅｘｐｏｓｕｒｅ　ｔｉｍｅ．Ｔｈｅ　５１．８８　ｋＤ　ａｎｄ　５１．８９　ｋＤ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　ＢｒＵＦ３ＧＴ１　ａｎｄ　ＢｒＵＦ３ＧＴ２　ｗｅｒｅ　ｓｕｅ—　

ｃｅｓｓｆｕｌｌｙ　ｐｕｒｉｉｅｄ　ａｆｔｆｅｒ　ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ＵＦ３ＧＴ　ｇｅｎｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｌｏｎｅｄ　ｆｒｏｍ‘Ｔｓｕｄａ’　

ｔｕｒｎｉｐ　ａｎｄ‘Ｙｕｒｕｇｉ　Ａｋａｍａｒｎ’ｔｕｒｎｉｐ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ，ｗｈｉｃｈ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙ　ｃｌａｒ—　

ｉｆｙｉｎｇ　ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅｓｅ　ｔｗｏ　ｔｕｒｎｉｐｓ．　

［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］ｔｕｒｎｉｐ；ＵＤＰ—ｇｌｕｃｏｓｅ：ｌｆａｖｏｎｏｉｄ　３－Ｏ－ｇｌｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ；ｇｅｎｅ　ｃｌｏｎｅ；ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ；ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　

植物花青素是重要的类黄酮类物质，积累在维　

收稿日期：２０１１－０６—１０　

基金项Ｅ１：黑龙江省博士后科研启动金（ＬＢＨ—Ｑ０８１４６）；中央高校基　

本科研业务费专项资金（ＤＬ１０ＣＡ０３）　

作者简介：许志茹（１９７２一），女，副教授　

管植物液泡中，决定花卉、果实和种子的颜色　。花　

青素的生物合成由一系列酶催化，ＵＤＰ一葡萄糖：类　

黄酮３－０一葡萄糖基转移酶（ＵＤＰ—ｇｌｕｃｏｓｅ：ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　

３－０一ｇｌｕｃ０ｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＵＦ３ＧＴ）是花青素合成晚期　

途径的重要催化酶，负责将糖基连接到不稳定的花　

通信作者：许志茹，（Ｅ—ｍａｉｌ）ｘｕｚｈｉｒｕ２００３＠１２６．ｃｏｎ　

许志茹等：芜菁ＵＦ３ＧＴ基因的克隆及表达特性　２３３　

青素上使之变成花青素糖苷，由此，糖基化的花青素　

才能稳定存在并运输到液泡中贮存　。目前，一些植　

ＡＣＣＡＡＴＧＣＣＣＴＣ一３　）。原核表达载体构建引物为　

Ｆ　１（５　一ＴＧＣＡＡＡＴＧＧＧＴＧＴＴＴＴＴＧＧＡＴＣＣ－３　）、Ｒ　１　

（５　一ＧＣＡＴＧＡＡＣＴＣＡＴＧＡＣＴＴＣＡＣＡＡＧＴＴＣ一３　）、Ｆ２　

物的ＵＦ３ＧＴ基因已经被克隆　。植物中，花青素的　

生物合成还与转录因子密切相关　。　

（５　一ＧＧＡＡＴＴＣＣＡＴＡＴＧＣＡＡＡＴＧＧＧＴＧ一３　）　和　Ｒ２　

光不仅提供植物光合作用所需的能量，同时也　

提供植物适应周围环境正常生长所需的信息。花和　

果实中的花青素生物合成与光受体和光信号传导因　

子密切相关　。紫外线可以调节植物中花青素的生　

物合成［１０］ｏ　ＵＶ—Ｂ照射可以诱导大豆（Ｇｌｙｃｉｎｅ　ｍａｘ　

（５　一ＴＡＡＡＡＧＴＴＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＧＡＡＣＴＣ一３　）（由于　

原核诱导表达引物引入酶切位点和保护碱基后序列　

过长，所以分２次ＰＣＲ反应将引物序列加全）。　

１．３　ＵＦ３ＧＴ全长ｃＤＮＡ的克隆及序列分析　

按许志茹等的方法克隆‘津田’和‘赤丸’芜菁的　

ｅｕｌｔｉｖａｒ　Ｓｉｎｐａｌｄａ１）花青素合成相关催化酶基因的上　

调表达　“。另外，‘津田’芜菁　Ｊ和ＢｒＦ３＂１４　基　

因的表达量随着ＵＶ—Ａ处理时间的延长而增加　，　

这种现象与花青素含量的增加是协同的。目前依光　

型和非依光型花青素的生物合成机理还不清楚。　

芜菁别名小蔓菁，十字花科芸苔属芜菁亚种。　

‘津田’芜菁（‘Ｔｓｕｄａ’ｔｕｒｎｉｐ）块根着色时需要光，受　

光照部分呈紫红色，背光部分呈白色。‘赤丸’芜菁　

（‘Ｙｕｒｕｇｉ　Ａｋａｍａｒｕ’ｔｕｒｎｉｐ）块根无论受光与否都呈　

红色，块根在黑暗条件下即可着色。我们以‘津田’　

芜菁和‘赤丸’芜菁为试材，通过ＲＴ—ＰＣＲ方法克隆　

了２种芜菁的　乃Ｇ　基因，利用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测　

了ＵＶ—Ａ处理条件下ＵＦ３ＧＴ基因的表达变化，同时　

通过原核诱导表达纯化了２种芜菁的ＵＦ３ＧＴ蛋白。　

这些工作将为分离依光型和非依光型花青素合成关　

键催化酶基因，研究依光型和非依光型花青素生物　

合成机理奠定基础。　

１材料与方法　

１．１　材料　

温室种植芜菁（Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ　Ｌ．ｓｓｐ．ｒａ．　

ｐｎ）‘津田’和‘赤丸’２个品种纯系，块根始终在土中　

避光生长。块根膨大２个月后，用３５２　ｎｍ的ＵＶ—Ａ　

［光照强度１３．５￣ｘｍｏｌ／（ｍ　・ｓ）］分别处理块根０、６、　

１２、１８、２４和４８　ｈ。　

ＬＡ—Ｔａｑ　ＤＮＡ聚合酶及ＤＮＡ　Ｍａｒｋｅｒ等购自宝　

生物工程有限公司（大连）；ｐＢＳ—Ｔ载体购自北京　

ＴＩＡＮＧＥＮ生化科技有限公司；ＰｏｗｅｒＳｃｒｉｐｔ反转录酶　

购自Ｃｌｏｎｔｅｃｈ公司；Ｎｏｒｔｈｒｅｎ杂交部分试剂购自　

Ｒｏｃｈｅ公司；原核表达蛋白纯化柱ＨｉｓＴｒａｐ　ＨＰ购自　

ＧＥ公司。　

１．２　引物序列　

在Ｄａｔａｂａｓｅ数据库中选取拟南芥的　乃Ｇ　基因　

序歹０设计ＲＴ—ＰＣＲ弓ｌ物Ｆ（５　一ＡＡＡＴＧＧＧＴＧＴＴＴＴＴＧ　

ＧＡＴＣＧ一３　）和Ｒ（５　一ＡＴＧＡＡＣＴＣＡＴＧＡＣＴＴＣＡＣＡＡ　

ＧＴＴＣ一３　）。探针合成的引物序列为Ｆ（５＂－ＴＧＴＴＴＧ　

ＣＴＡＣＡＡＴＡＣＣＧＴＣＡＧＣ一３　）和Ｒ（５　一ＧＡＡＧＡＡＡＧＡ　

ＵＦ３Ｇ　基因，测序后的核苷酸序列进行ＢＬＡＳＴ比　

对、开放读框（ＯＲＦ）寻找、分子进化树绘制及蛋白性　

质预测等生物信息学分析　。　

１．４　Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交　

利用地高辛标记探针，通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测２　

种芜菁中　３Ｇ　基因的表达变化情况　，重复３次。　

１．５　‘津田’芜菁ＵＦ３Ｇ　基因　，　Ｇ　和‘赤丸’芜　

菁ＵＦ３ＧＴ基因ＢｒＵＦ３ＧＴ２的原核诱导表达　

通过２次ＰＣＲ反应将含有Ｎｄｅ　Ｉ和ＮｏｔＩＩ酶切位　

点及保护碱基的核苷酸序列加到目的基因的两侧。　

回收纯化ＰＣＲ产物后，利用Ｎｄｅ　Ｉ和ＮｏｔＵ酶切ＰＣＲ　

纯化产物和载体ｐＥＴ一１４ｂ，回收酶切后的目的片段，　

在Ｔ　ＤＮＡ连接酶的作用下连接ＰＣＲ产物和载体酶　

切后的目的片段。连接产物热激转化大肠杆菌　

ＤＨ５　感受态细胞，提取质粒后通过ＰＣＲ和酶切验证　

筛选阳性克隆，测序验证阳性克隆。将测序正确的　

质粒转化到大肠杆菌ＢＬ２１中，ＰＣＲ验证。在ＬＢ液　

体培养基（含５０　ｍｇ／Ｌ氨苄西林）中接种含重组质粒　

ｐＥＴ一１４ｂ—ＢｒＵＦ３ＧＴ１和ｐＥＴ一１４ｂ—ＢｒＵＦ３ＧＴ２的大肠　

杆菌ＢＬ２１，３７ｏＣ培养至Ｄ　为０．５　０．６，留取０．５　ｍＬ　

菌液作为诱导前样品，剩余菌液加ＩＰＴＧ至终浓度为　

１　ｍｍｏｌ／Ｌ，继续培养诱导目的蛋白表达。３　ｈ后取　

５００　Ｌ诱导后样品，与诱导前样品一起经１２　０００　ｒ／　

ｍｉｎ离心１　ｍｉｎ收集菌体。弃上清，用６０　Ｌ　ｌｘＳＤＳ　

上样缓冲液吸打悬浮沉淀。１００ｏＣ加热５　ｍｉｎ，室温　

离心１　ｍｉｎ，取上清进行ＳＤＳ—ＰＡＧＥ，分析诱导结果，　

利用ＨｉｓＴｒａｐ　ＨＰ（ＧＥ　Ｈｅａｈｈｃａｒｅ）Ｈｉｓ标签亲和层析　

柱纯化融合蛋白ＢｒＵＦ３ＧＴ１和ＢｒＵＦ３ＧＴ２ｔ　】，　

ＳＤＳ—ＰＡＧＥ检测纯化结果。　

２　结果　

２．１　‘津田’芜菁和‘赤丸’芜菁　ＧＴ基因全长　

ｃＤＮＡ的克隆　

提取２种芜菁总ＲＮＡ后利用基因特异性引物进　

行ＲＴ—ＰＣＲ反应，结果（图１）显示，扩增的ｃＤＮＡ产　

物约为１４００　ｂｐ，大小与预期吻合。ＲＴ—ＰＣＲ产物经　

纯化、连接、转化和扩大培养后提取重组质粒。以质　

２６６　

ＬＥ　ｒＴＥＲ　

ＴＴ　Ｓ　ＩＮ技

ｖｏ１．・　２３　Ｎｔ…ｏ．２・　一Ｍａｒ．一一・，２，　…０１２一　

ＢＩＯＴＥＣＨＮ

０ＬＯＧ

Ｙ…

术

通

讯

［１０】Ｗａｃｋｅｒ　Ｍ，Ｌｉｎｔｏｎ　Ｄ，Ｈｉｔｃｈｅｎ　Ｐ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．Ｎ—ｌｉｎｋｅｄ　ｇｌｙｃｏｓｙｌ－　

３Ｉ５５—３１５６．　

ａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ　ｊｅｊｕｎｉ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｉｎｔｏ　

Ｅ，ｃｏｌｉ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００２，２９８（５５９９）：１７９０—１７９３．　

［１　１］Ｗａｅｋｅｒ　Ｍ，Ｆｅｌｄｍａｎ　Ｍ　Ｆ，Ｃａｌｌｅｗａｅｒｔ　Ｎ，ｅｔ　ａ１．Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ　ｓｐｅｃｉ—　

ｆｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　０ｌ　０ｓａｃｃｈａｒｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ　ｓｕｇｇｅｓｔｓ　ａ　ｃｏｍｍｏｎ　

ｔｒａｎｓｆｏｒ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｎｄ　ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ　ｓｙｓｔｅｍｓ　

［１８】Ｃａｓｔｒｉｃ　Ｐ．ｐｉｌｏ，ａ　ｇｅｎｅ　ｒｅｑｕｉｒｅｄ　ｆｏｒ　ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｓｅｕｄｏｍｏ．　

Ｉｌａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　１２４４　ｐｉｌｉｎ［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９９５，１４１（Ｐｔ５）：　

１２４７－１２５４．　

［１９］Ｄｉｇｉａｎｄｏｍｅｎｉｃｏ　Ａ，Ｍａｔｅｗｉｓｈ　Ｍ　Ｊ，Ｂｉｓａｉｌｌｏｎ　Ａ．ｅｔ　ａ１．Ｇｌｙｃｏｓｙｌ—　

ａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　１２４４　ｐｉｌｉｎ：ｇｌｙｃａｎ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅ　

［Ｊ】．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｅａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ，２００６，１０３（１８）：７０８８—７０９３．　

［１２］Ｆｅｌｄｍａｎ　Ｍ　Ｆ，Ｗａｃｋｅｒ　Ｍ，Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　

Ｎ—＿ｌｉｎｋｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｄｉｖｅｒｓｅ　Ｏ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｌｉｐｏｐｏｌｙ・　

ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００２，４６（２）：５１９—５３０．　

［２０］Ｓｍｅｄｌｅｙ　Ｊ　Ｒ，Ｊｅｗｅｌｌ　Ｅ，Ｒｏｇｕｓｋｉｅ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｐｉｌｉｎ　

ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ　ｏｎ　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　１２４４　ｐｉｌｕｓ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　

ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　ｉｎ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　

Ｓｃｉ　ＵＳＡ，２００５，ｌＯ２（８）：３Ｏ１６—３Ｏ２１．　

［１３】Ｃｈｅｎ　Ｍ　Ｍ，Ｇｌｏｖｅｒ　Ｋ　Ｊ，Ｉｍｐｅｒｉａｌｉ　Ｂ．Ｆｒｏｍ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｔｏ　ｐｒｏ－　

ｔｅｉｎ：ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅ　ｓｐｅｃｉｉｆｃｉｔｙ　ｏｆ　

［Ｊ］．Ｉｎｆｅｃｔ　Ｉｍｍｕｎ，２００５，７３（１２）：７９２２—７９３１．　

［２ｌ】Ｃｏｍｅｒ　Ｊ　Ｅ，Ｍａｒｓｈａｌｌ　Ｍ　Ａ，Ｂｌａｎｃｈ　Ｖ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　

ｏｆ　ｔｈｅ　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　１２４４　ｐｉｌｉｎ　ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ　ｓｉｔｅ　

『Ｊ１．Ｉｎｆｅｃｔ　Ｉｍｍｕｎ，２００２，７０（６）：２８３７—２８４５．　

［２２】Ｈｏｒｚｅｍｐａ　Ｊ，Ｄｅａｎ　Ｃ　Ｒ，Ｇｏｌｄｂｅｒｇ　Ｊ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅ．　

ｒｕｇｉｎｏｓａ　１２４４　ｐｉｌｉｎ　ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ：ｇｌｙｃａｎ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅ　ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ　

Ｎ—ｌｉｎｋｅｄ　ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２００７，４６　

（１８）：５５７９－５５８５．　

［１４】Ｋｏｗａｒｉｋ　Ｍ，Ｎｕｍａｏ　Ｓ，Ｆｅｌｄｍａｎ　Ｍ　Ｆ，ｅｔ　ａ１．Ｎ—ｌｉｎｋｅｄ　ｇｌｙｃｏｓｙｌ　

ａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｏｌｄｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｏｌｉｇｏｓａｅｃｈａｒｙｌｔｒａｎｓｆｅｒ－　

Ｕ】．Ｊ　Ｂａｅｔｅｒｉｏｌ，２００６，１８８（１２）：４２４４—４２５２．　

［２３】Ｈｏｒｚｅｍｐａ　Ｊ，Ｃｏｍｅｒ　Ｊ　Ｅ，Ｄａｖｉｓ　Ｓ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ　ｓｕｂ—　

ｓｔｒａｔｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ　ｏｆ　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　１２４４　ｐｉｌｉｎ［Ｊ］．Ｊ　

ａｓｅ［Ｊ１．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００６，３１４（５８０２）：１１４８—１１５０．　

［１５】Ｆａｒｉｄｍｏａｙｅｒ　Ａ，Ｆｅｎｔａｂｉｌ　Ｍ　Ａ，Ｍｉｌｌｓ　Ｄ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　

ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｏｌｉｇｏｓａｃｅｈａｒｙｈｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　

Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ，２００６，２８１（２）：１　１２８—１　１３６．　

［２４］Ｌｉｚａｋ　Ｃ，Ｆａｎ　Ｙ　Ｙ，Ｗｅｂｅｒ　Ｔ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｎ—Ｌｉｎｋｅｄ　Ｇｌｙｃｏｓｙｌ—　

ｉｎ　Ｏ－ｌｉｎｋｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ，２００７，１８９（２２）：　

８０８８—８０９８．　

ａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｎｔｉｂｏｄｙ　Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ｉｎ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ［Ｊ］．Ｂｉｏｅｏｎｊｕｇ　

Ｃｈｅｍ，２０１　１，２２（３）：４８８－４９６．　

【２５】Ａｄｄｅ￣ｏｎ　Ｅ　Ｅ．Ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅｓ　ｉｎ　ｉｎｆａｎｔｓ　ａｎｄ　ａｄｕｌｔｓ：ｅｆ－　

ｆｅｅｔｓ　ｏｆ　Ｔ—ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ａｎｄ　Ｔ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉ０ｎｓ［ＪＪ．　

Ｓｐｒｉｎｇｅｒ　Ｓｅｍｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ，２００１，２３（４）：３８７—４０３．　

［２６］Ｋｏｗａｒｉｋ　Ｍ，Ｙｏｕｎｇ　Ｎ　Ｍ，Ｎｕｍａｏ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　

ｂａｃｔｅｒｉａｌ　Ｎ—ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ　ｓｉｔｅ　ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ［Ｊ］．ＥＭＢＯ　

Ｊ，２００６，２５（９）：１９５７—１９６６．　

【１６］Ｆａｒｉｄｍｏａｙｅｒ　Ａ，Ｆｅｎｔａｂｉｌ　Ｍ　Ａ，Ｈａｕｒａｔ　Ｍ　Ｆ，ｅｔ　ａ１．Ｅｘｔｒｅｍｅ　

ｓｕｂｓｔｒａｔｅ　ｐｒｏｍｉｓｃｕｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ　ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｙｌ　ｔｒａｎｓｆｅｒ—　

ａｓｅ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　０一ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ，２００８，　

２８３（５０）：３４５９６—３４６０４．　

［１７］Ｙｅ　Ｘ　Ｙ，Ｌｏ　Ｍ　Ｃ，Ｂｒｕｎｎｅｒ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｂｅｔｔｅｒ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ　ｆｏｒ　ｂａｃ—　

ｔｅｒｉａｌ　ｔｒａｎｓｇｌｙｃｏｓｙｌａｓｅｓ［Ｊ］．Ｊ　Ａｍ　Ｃｈｅｍ　Ｓｏｃ，２００１，１２３（１３）：　

（上接第２３７页）　

Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｔｈａｌｉａｎａ　ｒｏｏｔ　ｇａｌｌｓ　ｃａｕｓｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｏｂｌｉｇａｔｅ　ｂｉｏｔｒｏ－　

ｐｈｉｃ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ　ｂｒａｓｓｉｃａｅ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｐｌａｎｔ　Ｐａｔｈｏｌ，　

［１　１】Ｋｉｍ　Ｂ　Ｇ，Ｋｉｍ　Ｊ　Ｈ，Ｋｉｍ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｌｓ　

ｉｎ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｏ　ｕｈｒａｖｉｏｌｅｔ－Ｂ　ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｓｏｙｂｅａｎ　ｉｓ　ｒｅｌａｔｅｄ　

２０１０，１１（４）：５４５—５６２．　

［１７］许志茹，崔国新，李春雷，等．芜菁黄烷酮３一羟化酶基因的克　

隆、序列分析及表达ＩＪ】．分子植物育种，２００８，６（４）：７８７—７９２．　

［１８】Ｚｈｏｕ　Ｂ，Ｌｉ　Ｙ　Ｈ，Ｘｕ　Ｚ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ－Ａ　ｓｐｅｃｉｉｆｃ　ｉｎｄｕｃ—　

ｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｗｏｌｌｅｎ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌｓ　ｏｆ　

ｔｏ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌａｖａｎｏｎｅ　３一Ｂ—ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ　ａｎｄ　ｆｌａｖｏｎｏｌ　ｓｙｎ—　

ｔｈａｓｅ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｃｅｌｌｓ，２００８，２５（２）：２４７—２５２．　

【１２】许志茹，崔国新，李春雷，等．芜菁的类黄酮３’羟化酶基因克　

隆和ｕＶ—Ａ诱导表达特性［Ｊ】．植物生理学通讯，２００８，４４（５）：　

９３１－９３５．　

ｔｕｒｎｉｐ（Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｒａｐａ）［Ｊ］．Ｊ　Ｅｘｐ　Ｂｏｔ，２００７，５８（７）：１７７１—１７８１．　

［１９］Ｌｅｅ　Ｙ，Ｙｏｏｎ　Ｈ　Ｒ，Ｐａｉｋ　Ｙ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｃｉｐｒｏｃａｌ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　

Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ＵＧＴ７８Ｄ２　ａｎｄ　ＢＡＮＹＵＬＳ　ｉｓ　ｃｒｉｔｉｃａｌ　ｆｏｒ　ｒｅｇｕｌａ—　

ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ｆｌｕｘ　ｏｆ　ａｎｔｈ０ｃｙａｎｉｄｉｎｓ　ｔｏ　ｃｏｎｄｅｎｓｅｄ　ｔａｎ—　

【１３］许志茹，崔国新，李春雷，等．津田芜菁和赤丸芜菁苯丙氨酸　

解氨酶基因（ＰＡＬ）的克隆和表达［Ｊ】．植物生理学通讯，２００８，４４　

（３）：４８５－４９０．　

【１４］许志茹，李玉花．利用ｃＤＮＡ微阵列分离津田芜菁花青素生物　

合成相关基因［Ｊ］．遗传，２００６，２８（９）：１１０１－１１０６．　

［１５】李波，倪志勇，石庆华，等．棉花咖啡酸一０一甲基转移酶基因原　

核表达及蛋白纯化鉴定［Ｊ］．西北植物学报，２０１０，３Ｏ（９）：　

１７３８—１７４３．　

ｎｉｎｓ　ｉｎ　ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ　ｓｅｅｄ　ｃｏａｔｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｐｌａｎｔ　Ｂｉｏｌ，２００５，４８（４）：　

３５６—３７０．　

［２０］Ｌａｌｕｓｉｎ　Ａ　Ｇ，Ｏｈｔａ　Ｍ，Ｆｕｊｉｍｕｒａ　Ｔ．Ｔｅｍｐｏｒａｌ　ａｎｄ　ｓｐａｔｉａｌ　ｅｘ—　

ｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｄｕｒｉｎｇ　

ｓｗｅｅｔ　ｐｏｔａｔｏ（１ｐｏｍｏｅａ　ｂａｔａｔａｓ［Ｌ．】Ｌａｍ．）ｒｏｏｔ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［Ｊ］．　

Ｉｎｔ　Ｊ　Ｐｌａｎｔ　Ｓｃｉ，２００６，１６７（２）：２４９—２５６．　

【１６］Ｐａｓｏｌｄ　Ｓ，Ｓｉｅｇｅｌ　Ｉ，Ｓｅｉｄｅｌ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｉｎ